填寫資料 （電話、郵編和備注選填，其余均為必填項）
蛋白質全譜分析也可稱為Shotgun分析，指的是組分分析，研究對象是完整的組織、體液或其提取物，其目的在于鑒定出盡可能多的肽和蛋白質分子。并由此衍生出宏蛋白質組學，即研究與宏基因組或者宏轉錄組對應的復雜樣品中蛋白質的表達。
技術原理
將溶液內蛋白質分子或SDS-PAGE條帶中的復雜混合物酶解成肽段混合物，通過液相色譜分離，如2D-LC（陽離子柱SCX和C18反相柱串聯）或1D-LC的C18反相柱。串聯質譜檢測，最后利用相應的數據庫進行檢索匹配，可鑒定到成百上千種蛋白質。
技術流程
Orbitrap Fusion Tribrid，Triple TOF 5600，Q-Exactive
高通量，分離能力強；
兼容性強，可分析蛋白質條帶、組織提取液、全細胞裂解液、亞細胞分離組分等；
自動化程度高。
對某一生理狀態下組織、細胞或者細胞器中所有表達蛋白質進行鑒定；
對一些環境樣本及腸道微生物等復雜樣品中的蛋白質進行鑒定。
送樣要求
|
樣品類型 |
樣品要求（/組樣品） |
備注 |
|
蛋白質溶液 |
蛋白質總量≥300μg |
重復實驗則量翻倍，建議準備兩份樣品備用。 |
|
組織樣品 |
樣品總量≥0.1g |
按照蛋白質組織提取效率（蛋白：組織=7%） |
|
細胞樣品 |
細胞數量≥107個 |
胰酶消化，按細胞凍存標準離心收集細胞即可。 |
|
體液樣品 |
血清≥200μL，腦脊液≥200μL，尿液≥1mL ，淚液≥1mL. |
|
研究者利用LC-MS-MS技術對人類60個組織，13個體液，以及147個腫瘤細胞系樣本的蛋白質進行了定性研究，大致鑒定到了18000個蛋白質。
圖1 人類蛋白質組的整合策略
圖2 人類蛋白質組的整體分析
參考文獻
Wilhelm, M., et al. (2014) Mass-spectrometry-based draft of the human proteome. Nature 509, 582-587
1、 目前可進行蛋白質組全譜分析的物種有哪些？
只要物種的蛋白質組、基因組或轉錄組的數據庫數據足夠豐富，均可進行蛋白質組全譜分析。如果上述條件均不滿足，可在進行蛋白質組全譜分析的同時，做一個基因組或轉錄組測序，以便為蛋白質組全譜分析提供支持。因此，理論上，所有的物種均可進行蛋白質組全譜分析。
2、全譜分析一般能鑒定到多少種蛋白？
這取決于分析樣品的復雜程度、數據庫完善度、蛋白含量和蛋白質組分離程度等。如植物來源的樣本中蛋白質種類和數量通常比動物來源的樣本多，動物組織樣本中蛋白質種類和數量比其血液樣本多。通常情況下，全譜分析可以鑒定到1000~3000種蛋白。
微信掃一掃
